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PPA制備與使用的基本技術
點擊次數:3366 更新時間:2014-12-29

PPA制備與使用的基本技術

  • 將初步純化的SPA與HRP用過碘酸鈉氧化法(交聯反應時間在22℃下5h)交聯。
  • 將上述PPA溶液過Sephadex G-100柱,條件同前。所收集的第1管至第22管的合并液,是PPA存在的主要組分,可用ELISA塑料平板法檢測活性。將合并液濃縮,然后加入30%左右甘油,貯于4℃冰箱備用

     PPA的使用

  • PPA-ELISA法。基本上與ELISA法相同,PPA代替了酶標抗抗體。在進行微量反應板測定時,PPA常常加入0.1ml,稀釋度一般在1:2至1:100(應按不同情況試驗)。PPA與IgG是化學共價結合,反應時間不宜過長,不應超過2h,控制在30min-60min,反應時間過長會使PPA吸附到塑料載體上去。
  • 用PPA進行組織內有關抗原的定位。甲醛對PPA有顯色影響,因此組織不可用甲醛固定,可用甲醛、乙醇等。PPA對組織內抗原(先與IgG結合)的定位,反應時間可以延長,便于滲透入組織細胞內,且沒發現嚴重的物理吸附現象。
  • 在PPA實驗中稀釋液常用含0.5%(v/vTween20的0.02mol/L Ph 7.4 Tris-HC1緩沖液(2.42gTris溶于蒸餾水后用0.1N HC1調pH至7.4,然后加蒸餾水定容至1000ml,zui后加0.5ml Tween 20
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