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BCA蛋白定量試劑盒說明書
點擊次數(shù):2393 更新時間:2020-06-19

  

 

BCA蛋白定量試劑盒說明書

 

BCA Protein Assay Kit

BCA蛋白定量試劑盒

 

目錄號:K0014

 

 

保存條件:BSA標準品2-8℃保存,其它組分室溫保存。

 

 

組分說明

 

            Cat. No.                             K0014

            Kit Size                     500 次/微孔,50 次/試管

            試劑  A                                 100 ml

            試劑  B                                  3 ml

            BSA 標準品 (2mg/ml)                       2 ml

 

 

               本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途  

 

 

產品簡介

 

  BCA蛋白定量法是目前廣泛使用的蛋白定量方法之一。本產品是基于  BCA(Bicin

-choninic   Acid)法研制而成,實現(xiàn)了對蛋白質進行快速、穩(wěn)定、靈敏的濃度測定。其

原理是在堿性環(huán)境下蛋白質分子中的肽鏈結構能與Cu2+絡合生成絡合物,同時將Cu2+

處原成有高的光吸收Cu+。BCA試劑值,可敏感特異地與顏色的深淺與蛋白Cu結質濃合,形成度成正比,可根據(jù)吸收穩(wěn)定的有顏色的復值合物。在的大小來562測 定蛋nm

白質的含量。本試劑盒含有牛血清白蛋白( BSA)溶液作為蛋白質標準品溶液,測定

范圍為20~2000 μg/ml。

 

注意事項

 

1.本產品可以采用分光光度計(試管檢測法)或者酶標儀(微孔檢測法)測定蛋白濃度。

2.建議每次測定蛋白樣品時,繪制標準曲線,以獲得準確數(shù)據(jù)。

3.BSA標準品的稀釋液需與待測樣品的稀釋液一致(可用1×PBS或0.9%生理鹽水進行

   稀釋)。

4.完成37℃孵育30分鐘或室溫孵育2小時后,須在3-5分鐘內完成檢測,否則會影響蛋

   白定量的準確度。

5.如待測樣品中含較多的干擾物質(具體見附表1),可采用Bradford法蛋白定量試劑

   盒(K0013)或其他蛋白定量產品。

 

操作步驟

 

1.稀釋BSA標準品:用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋BSA標準品。

 

                                        

                                                   

管號      稀釋液用量(μl)  BSA標準品用量(μl)   BSA標準品終濃度(μg/μl)

                                                        

A                0                100                       2

B               200               200                       1

C               200         200(從B管中取)               0.5

D               200         200(從C管中取)               0.25

E               200         200(從D管中取)              0.125

F               200         200(從E管中取)              0.0625

G               200                0                       0(空白)

 

2.配置BCA工作液:

   1)計算BCA工作液總量:                      

   BCA工作液總量=(BSA標準品樣本個數(shù)+未知樣本個數(shù))×復孔數(shù)×每個樣本BCA工作液體積

   舉例:BSA標準品樣本個數(shù)為7個,未知樣本個數(shù)2個,復孔數(shù)3個。

 

   試管檢測法:

 

   BCA工作液總量=(7個BSA標準品樣本+2個未知樣本)×3個復孔×2 ml/每個樣本工作液體積=54 ml

   微孔檢測法:

 

   BCA工作液總量=(7個BSA標準品樣本+2個未知樣本)×3個復孔×200 μl/每個樣本工作液體積=5.4ml

   2)根據(jù)計算出的BCA工作液需要總量,將試劑A和試劑B按照50:1的體積比,配制

   BCA工作液,充分混勻。

 

   注意:1)由于加樣可能存在誤差,建議配制BCA工作液時,多配制1-2個孔。

   2)新配制的BCA工作液室溫密封條件下可穩(wěn)定保存24小時。

3.定量檢測

3a.試管檢測法(蛋白濃度檢測范圍:20-2000 μg/ml)

   1)按上表,將稀釋好的A-G BSA標準品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各100 μl

   分別加到作好標記的試管中。推薦每個測定的樣本做2-3個平行反應。

   2)向每個試管中各加入2 ml BCA工作液,充分混勻,37℃水浴中孵育30分鐘或室

   溫孵育2小時。

   3)將各管冷卻至室溫。

   4)用分光光度計在562 nm處測定每個樣品及BSA標準品的吸光值,同時做好記錄。

   5)繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。

3b.微孔檢測法(蛋白濃度檢測范圍:20-2000 μg/ml)

   1)按上表,將稀釋好的A-G BSA標準品和待測蛋白樣品(原液或稀釋液)各25 μl分

   別加到作好標記的96孔板微孔中。推薦每個測定的樣本做2-3個平行反應。

   2)每孔加入200 μl BCA工作液,充分混勻,蓋上96孔板蓋,37℃孵育30分鐘。

   3)冷卻至室溫。

   4)用酶標儀在540-590 nm范圍內,測定每個樣品及BSA標準品吸光值,做好記錄。

   5)繪制標準曲線,計算樣品中的蛋白濃度。

 

   注意:1)BCA法測定蛋白濃度時,吸光值會隨著時間的延長不斷加深。因此所有樣品測定需在3-5 分鐘內完成,否則會影響蛋白定量的準確度。

 

   2)建議以去除背景值后的吸光值讀數(shù)繪制標準曲線。

 

   3)由于操作誤差導致標準品讀數(shù)嚴重偏離線性曲線的應舍去。

 

   4)未知樣品濃度可以從標準曲線方程中計算得出, 實際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。

   5)如果得到的蛋白濃度不在檢測范圍內,請重新稀釋樣品后再次測定。

 

    4.BCA蛋白定量分析結果舉例:

               

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